在Western Blot實(shí)驗(yàn)中,蛋白Marker的作用就像是參照標(biāo)尺,用于目標(biāo)蛋白分子量大小的確定、蛋白分離成功與否的判斷等。因此,選擇合適的蛋白 Marker,對實(shí)驗(yàn)來說至關(guān)重要,那你知道蛋白Marker的分類是如何劃分的嗎?讓我們一起來看看吧!
一、非預(yù)染蛋白Marker
非預(yù)染蛋白Marker是幾種已知分子量并純化好的蛋白質(zhì)預(yù)混液,方便不同大小的蛋白比較。其條帶在結(jié)合染料時,分子量不會改變,可準(zhǔn)確評估SDS-PAGE的蛋白樣品分子量。
非預(yù)染蛋白Marker在電泳過程中看不到,電泳結(jié)束后經(jīng)過蛋白染色后才能起指示作用,無法在實(shí)驗(yàn)過程中起預(yù)示參照作用,屬于“后知后覺"型的。
二、預(yù)染蛋白Marker
預(yù)染蛋白 Marker 在生產(chǎn)時就結(jié)合了染料,所以不同分子量的條帶會呈現(xiàn)出不同顏色,讓我們在電泳過程中就能輕松識別。預(yù)染蛋白Marker則可以在電泳時、電泳后,以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況和估計遷移率,預(yù)染蛋白Marker的出現(xiàn)方便了實(shí)驗(yàn)人員的操作。
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