流式細胞術(shù)(FCM)是一種對處在快速流動中的細胞或其它生物微粒逐個進行多參數(shù)的快速定量分析和分選的技術(shù)。它集計算機技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學(xué)、熒光標(biāo)記技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)、細胞免疫學(xué)于一體,按照細胞或生物顆粒的物理或化學(xué)性質(zhì),同時具有分析和分選細胞或生物顆粒的功能。
流式細胞術(shù)在科研方面有哪些應(yīng)用?讓我們一起來看看吧!
一、細胞凋亡檢測
在正常細胞中,細胞膜上的磷脂酰絲氨酸(PS)位于胞漿側(cè)。細胞凋亡中期,PS 外翻。Annexin V 是一種 Ca2+ 依賴的對 PS 具有高度親和力的磷脂結(jié)合蛋白,因此可以用熒光標(biāo)記的 Annexin V 檢測 PS 的外翻。凋亡末期,細胞膜結(jié)構(gòu)受損,原本不透膜的核酸染料(如 PI、7-AAD 等)也能進入細胞,從而產(chǎn)生信號。分別檢測 Annexin V 和不透膜核酸染料的信號,可對凋亡中期和末期細胞的比例進行定量。
二、細胞周期檢測
細胞核 DNA 含量隨著細胞增殖周期時相的不同而發(fā)生變化,用 DNA 染料進行染色,DNA 含量多,熒光信號強,DNA 含量少,熒光強度低。通過對細胞瞬間的快速測定,判斷細胞所處的細胞周期時相,并分析群體細胞中處于不同周期時相的細胞比例,以研究細胞的周期,DNA 復(fù)制和染色體倍性等。在腫瘤學(xué)研究中尤其常用,可以此來判斷藥物對腫瘤細胞影響、腫瘤的生長速度與患者預(yù)后等。
三、Th/Treg檢測
通過刺激阻斷劑對 T 細胞進行處理,通過檢測表面或胞內(nèi)標(biāo)志物進行分型檢測。
四、免疫分型檢測
利用細胞表面或細胞內(nèi)特異性抗體分子,分別選用不同標(biāo)記的流式抗體對細胞進行分型和分析。